通道载玻片--受牙龈菌感染的Ca9-22细胞中IL-33免疫荧光染色实验

细胞的免疫荧光实验是一个基础的细胞实验,传统的方法是在培养板中放入预先处理好的盖玻片,待细胞贴壁后,使用镊子将盖玻片拿出再开始进行固定,染色等系列工作。为了简化这一工作,一系列底部适合直接成像的细胞耗材应运而生,如图:

 
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日本的科研人员在研究细胞因子IL-33在Ca9-22细胞中免疫荧光染色试验时使用了一种通道载玻片。IL-33是一种在内皮细胞中常规表达的细胞因子,其参与调节了先天免疫细胞的Th2 细胞因子介导的免疫应答。研究人员想研究增强IL-33表达的牙周内皮细胞中牙周菌Porphyromonas gingivalis所发挥的作用。研究人员使用牙周菌P.gingivalis刺激Ca9-22细胞,再测试其中IL-33的表达。
 
Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells
H. Tada, T. Matsuyama, T. Nishioka, M. Hagiwara, Y. Kiyoura, H. Shimauchi and K. Matsushita
PloS one, 2016, 10.1371/journal.pone.0152794
 
一)实验材料:
1)Ca9-22细胞
2)牙周菌P.gingivalis      50 μg/ml
3)多聚甲醛溶液            4%
4)BSA                    1%PBST溶液
5)藻红蛋白偶联的大鼠抗人IL-33抗体  (clone, 390412; R&D Systems)
6)DAPI
8)六通道载玻片          ibiTreat,德国ibidi公司,80606
图一:通道载玻片示意图。细胞的免疫荧光实验简化,并且节约试剂(单通道30μl),细胞分布及其均匀,成效效果好。
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二)实验步骤
1)单通道铺入3×105 Ca9-22细胞,37℃,5%CO2环境中孵育过夜待细胞贴壁。
2)使用无细胞培养基,轻轻冲洗通道,移除未贴壁细胞(图二)。
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图二:冲洗换液方法,蓝色代表新的无细胞培养基
3)用50 μg/ml牙周菌P.gingivalis,(MOI为0.13)加入通道中,刺激Ca9-22细胞4天
4)用4%的多聚甲醛固定15分钟
5)用1%BSA的PBST溶液封闭30分钟
6)使用0.5μg/ml的藻红蛋白偶联的大鼠抗人IL-33抗体4℃孵育1小时
7)DAPI孵育1分钟
8)用荧光显微镜观测数据。
 
三)实验结果
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图三:牙周菌P.gingivalis增强牙周内皮细胞中IL-33的表达。用50 μg/ml牙周菌P.gingivalis,刺激Ca9-22细胞后使IL-33(红色)表达有显著的提高。细胞核(蓝色)

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