伤口愈合/细胞划痕实验新方法

          细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。 基本的步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。 

 

特点: 
 

1.  在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。


2.  
非常适合研究细胞与胞外基质(ECM),细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。


3.  
与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容,可用于分析细胞间的相互作用。


4.  
研究细胞迁移的体外实验中简单的方法。


传统实验方法 实验步骤: 
 

1.  培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一 个视野)。


2.  
细胞消化后接入12孔板,数量以贴壁后铺满板底为宜(数量少时可培养一段时间至铺满板底)。


3.  
细胞铺满板底后,用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕,尽量保证各个划痕宽度一致。(人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性,影响实验结果,这也是该方法大的缺陷。)


4.  
吸去细胞培养液,用PBS冲洗孔板三次,洗去划痕产生的细胞碎片。

 


5.  
加入无血清培养基,拍照记录。


6.  
将培养板放入培养箱培养,每隔4-6小时取出拍照。


7.  
根据收集图片数据分析实验结果。


Culture Insert
方法 
  81176 280×280.jpg

1.  准备细胞,培养液,culture Insert


2.  
如图,将细胞接种于Dish中间的Insert,细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500 μm宽度的划痕。


3.  
每隔4-6小时拍照记录。


4.  
根据收集图片数据分析实验结果。 
 
 2.jpg

3.jpg
 

实验原理示意图

 

总结:相比较于传统的划痕实验,Ibidi的设计更科学、重现性更好: 
 
 4.jpg
 

除了保证划痕均一性的难题,相信各位同学觉得难的还有后期实验结果的处理,这里给大家分享一个操作非常简单的在线软件,只需注册就可以免费使用,只要上传图片很快就能把实验结果发到注册邮箱,非常方便。

Wound Healing Image Analysis - WimScratch
 5.jpg
 
 

Analysis Data Contains: 
 

Cell covered area

Speed of closure (available  5 images)

Acceleration characteristics (available  5 images)

Overview chart

Center piece approximation (available  10 images)

 

 

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