在 µ-Slide 球体灌注载玻片中的L929 球体进行 FDA/PI 活/死染色

date:2021-08-12 14:28:55

本应用是在 µ-Slide Spheroid Perfusion 中对球体进行荧光染色的示例。

2.jpg

我们使用荧光素二乙酸酯 (FDA) 和碘化丙啶 (PI),这是用于分别区分活细胞和死细胞的标准染色。FDA 被活细胞吸收,将非荧光 FDA 转化为绿色荧光代谢物荧光素。测量的信号用作活细胞的指标,因为转化是酯酶依赖性的。相比之下,细胞核染色染料 PI 不能通过活细胞的细胞膜。只有在死细胞中,它通过无序的细胞膜区域到达细胞核,并插入细胞的 DNA 双螺旋。

同时使用这两种荧光染料可以轻松区分 3D 球体中的活细胞和死细胞群。

3.jpg

重要提示:

与标准方案相比,使用 µ-Slide Spheroid Perfusion 进行染色需要更多的孵育时间和更多的洗涤步骤。这是为了确保染料和抗体充分扩散到利基区域。

相关文件:

在球体灌注载玻片中生成L929球体并进行动态培养实验

关键词:

荧光显微镜、活细胞成像、活/死细胞染色、二乙酸荧光素 (FDA)、碘化丙啶 (PI)

材料:

· μ-Slide Spheroid Perfusion Bioinert (80350, ibidi, Germany) 用于 L929 球体制备,见上面相关文件内容详情

· PI(CN74.2, Carl Roth)

· FDA (F7378, Sigma Aldrich)

· 细胞培养基(21875034,RPMI-1640,Gibco)

· 带有合适滤光片组的荧光显微镜

1.jpg

染色:

· 在无血清细胞培养基中制备染色溶液,以获得 PI 的最终浓度:200 µg/ml 和 FDA:80 µg/ml。

· 根据说明进行培养基更换并填充染色溶液。

· 在 37°C 和 5% CO2下孵育 30 分钟。

· 进行培养基交换并填充细胞培养基。此洗涤步骤将去除染色溶液。洗三遍。在每个洗涤步骤之间等待 10 分钟。

成像-结果:

· 用合适的滤片组在荧光显微镜下观察细胞。

· 或者,叠加图像以创建合并图像。

图片.png

使用 ibidi 泵系统以 0.75 毫升/分钟灌注培养 14 天后,在 µ-Slide 球体灌注中用FDA/PI对 L929 球体进行活/死染色,Bioinert。绿色:活细胞(二乙酸荧光素,FDA);红色:死细胞(碘化丙啶,PI)。宽场荧光显微镜,10x 物镜。

ICP备案号:沪ICP备15057650号-1 © Copyright 2015 雷萌生物科技(上海)有限公司 保留所有版权.

首页   |   产品中心   |   产品应用   |   技术支持   |   新闻中心   |   关于我们   |   ibidi官网